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    大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞的凍存與復蘇操作

    發表時間:2022-02-21  |  點擊率:117
     
      大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞使用10%DMSO凍存液冷凍,采用干冰保存運輸,收到細胞后,如果不立即復蘇,請將細胞放入液氮中保存待用。切勿置于室溫下,以免造成DMSO損傷,避免反復凍融。
     
      大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)房冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
     
      冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
     
      大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)復蘇操作要點:
     
      1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)管,加入8mL預熱培養基。
     
      2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
     
      3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)管內。
     
      4)800rpm離大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
     
      5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
     
      6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
     
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