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    小鼠抗IgE受體抗體elisa試劑盒要如何使用

    發表時間:2022-05-06  |  點擊率:24
     
      小鼠抗IgE受體抗體elisa試劑盒用抗小鼠IgE單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的IgE與單抗結合,加入酶標抗體,形成免疫復合物連接在板上,加入酶底物TMB,出現藍色,加終止液硫酸,顏色變黃,在450nm處測OD值,IgE濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中IgE濃度。
     
      小鼠抗IgE受體抗體elisa試劑盒準備試劑與收集血樣:
     
      1.收集標本:血清、血漿(肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。正常標本測定前用標本稀釋液作1:10稀釋(取20ul,加標本稀釋液180ul,稀釋10倍)。
     
      2.標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成2500ng/ml的溶液。設標準管8管,第一管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在第一管中加入2500ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
     
      3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
     
      4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
     
      檢測程序
     
      1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
     
      2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。。
     
      3.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃60分鐘。
     
      4.洗板:同前。
     
      5.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。
     
      6.每孔加入100ul終止液混勻。
     
      7.30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
     
      結果計算與判斷
     
      1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。
     
      2.以標準品250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9、0ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
     
      3.根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應IgE含量,再乘上稀釋倍數即可。
     
      試劑盒性能
     
      1.靈敏度:最小的IgE檢測濃度小于2ng/ml。
     
      2.特異性:可同時檢測重組或天然的小鼠IgE。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。
     
      3.重復性:板內、板見變異系數均小于12%。
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